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ELISA阴性值偏高是什么原因

日期:2024-03-27 00:05
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摘要: ELISA阴性值偏高是什么原因 你的空白值是多少呢?如果空白值也是0.1那可能是有非特异性吸附.你可以尝试不包被抗原,直接封板子加二抗,看看还显不显色,有时二抗会有非特异性吸附的.如果是非特异性吸附,可以用封闭液来稀释一抗和阴性,这样可以起到封闭非特异性吸附的作用。 ELISA显色深浅除了和抗原抗体特异性结合有关外,还和酶标板的物理吸附能力有很大的关系。还有一点就是象棋筛子说的,阴性稀释倍数大了也有可能会显色,阴性稀释倍数与一抗的稀释倍数*好相同,这样才有可比性。 我的程序: ...

ELISA阴性值偏高是什么原因

你的空白值是多少呢?如果空白值也是0.1那可能是有非特异性吸附.你可以尝试不包被抗原,直接封板子加二抗,看看还显不显色,有时二抗会有非特异性吸附的.如果是非特异性吸附,可以用封闭液来稀释一抗和阴性,这样可以起到封闭非特异性吸附的作用。

ELISA显色深浅除了和抗原抗体特异性结合有关外,还和酶标板的物理吸附能力有很大的关系。还有一点就是象棋筛子说的,阴性稀释倍数大了也有可能会显色,阴性稀释倍数与一抗的稀释倍数*好相同,这样才有可比性。

我的程序:

4度包被过夜—PBST洗2-3遍

—加封闭液,37度1小时——洗2-3遍

——加血清,PBS稀释血清,37度2h——洗5遍

——加二抗,37度1h——洗5遍

——OPD显色

阴性孔没加血清,PBS代替,其他和样品孔相同。

个人认为造成阴性值偏高的主要原因有以下几种可能:

1 阴性标本污染,赶紧换一批标本

2 ELISA系统问题:a 显色时间过长,尽量保持每一次显色时间一致

b 二抗的非特诣性吸附,所以每次可做二抗测试

3 硬件问题---酶标板,国外吸附性太强,国内的批间差诣等等


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